Science:張峰建立CRISPR/Cas9人細胞敲除體系

  • 來源:
  • 時間:2013/12/15 下午 07:47:00
  • 點擊:1194

 

2013-12-13 來源:ebiotrade 作者:koo
 
Science:张峰建立CRISPR/Cas9人细胞敲除体系
日前,來自麻省理工學院,哈佛醫學院等機構的研究人員完成了人類細胞全基因組範圍內CRISPR/Cas9 敲除篩選,這對於CRISPR/Cas9 技術的發展具有重要意義。
 
相關研究論文刊登在了近期出版的《科學》雜誌上。文章的通訊作者是麻省理工學院腦與認知科學助理教授、McGovern 腦研究所和Broad研究所核心成員張峰(Feng Zhang,音譯)。張峰日前與其他4 位CRISPR 技術開創者共同建立了愛迪塔斯醫藥公司(Editas Medicine),該公司打算利用CRISPR 基因編輯技術治療疾病。
 
CRISPR/Cas9 技術成為了最近的新寵兒,這種基因組編輯技術更易於操作,也具有更強的擴展性。此前張峰研究組曾利用細菌RNA,引導Cas9 核酸酶在小鼠和人類基因組的特定基因位點上進行切割,完成了精確的目標鏈斷裂。他表示,&ldquoCRISPR 系統即使在從細菌細胞中取出酶和RNA,然後再插入到哺乳動物細胞中之後,依然能如此有效的工作,這令人驚訝。&rdquo
 
在此基礎上,研究人員發現靶向18080 個基因(64751 個獨特靶向序列)的全基因組範圍CRISPR/Cas9 敲除(GeCKO)文庫慢病毒傳遞,能進行在人類細胞中的正向和負向選擇性篩選。研究人員先利用GeCKO 文庫鑑定了對癌症和多能幹細胞細胞活力必不可少的基因,其次他們還在一個黑素瘤模型中,篩選出了涉及藥物維羅非尼(Vemurafenib)耐藥性的基因。
 
從中研究人員篩選出了多個有效的基因,比如之前曾發現的NF1 和MED12,以及未曾發現過的NF2,CUL3,TADA2B 和TADA1 。研究人員指出靶向同一基因的獨立導向RNAs之間存在高度的一致性和高命中確認率,這對於Cas9基因組範圍內篩選具有重要意義。
 
目前靶向基因組編輯技術已廣泛用於基礎研究和臨床應用。 CRISPR/Cas9 系統中的Cas9 核酸酶能通過20nt 導向序列靶向特異性基因組位點,允許某些與DNA 靶標的錯配,從而促進一些意外脫靶突變的形成。張峰研究組此前還揭示了一種增加基因組編輯特異性的新方法,即利用RNA 導向的CRISPR/Cas9 系統形成雙切口,在未影響靶向切割效率的前提下,方便小鼠受精卵基因敲除研究。
copyright ®TaiwanLab 版權所有
要在臺灣實驗室網投放廣告或成為我們的特約贊助商,請聯繫我們