食品中黴菌毒素檢驗方法-T-2 毒素及HT-2 毒素之檢驗

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  • 時間:2009/9/28 上午 11:02:00
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食品中黴菌毒素檢驗方法-T-2 毒素及HT-2 毒素之檢驗
Method of Test for Mycotoxin in Foods-Test of T-2 Toxin and HT-2 Toxin


1. 適用範圍:本檢驗方法適用於穀類及其製品中T-2 毒素及HT-2 毒素之檢驗。
2. 檢驗方法:高效液相層析法(high performance liquid chromatography,HPLC)。
  2.1 裝置:
    2.1.1 高效液相層析儀:
    2.1.1.1 檢出器:螢光檢出器(fluorescence detector)。
    2.1.1.2 層析管:SunFire C18,3.5 &mum,內徑4.6 mm×15 cm,或同級品。
    2.1.2 粉碎機(Grinder)。
    2.1.3 旋渦混合器(Vortex mixer)。
    2.1.4 離心機(Centrifuge)
    2.1.5 氮氣蒸發裝置(Nitrogen evaporator)。
    2.1.6 超音波振盪器(Ultrasonicator)。
  2.2 試藥:乙?及甲醇均採用液相層析級;4-二甲基胺基(4-dimethylaminopyridine)及2甲醯基氯(2-naphthoylchloride)均採用試藥特級;T-2 毒素及HT-2 毒素對照用標準品。
  2.3 器具及材料:
    2.3.1 塑膠離心管:15 mL 及50 mL,附PP 材質螺旋蓋。
    2.3.2 容量瓶:10 mL。
    2.3.3 微量吸管:100 &muL。
    2.3.4 濾膜:直徑47 mm,孔徑0.45 &mum,Nylon 材質。
    2.3.5 濾紙:Whatman No. 4,直徑11 cm,或同級品。
    2.3.6 玻璃纖維濾紙:直徑9 cm。
    2.3.7 免疫親和性管柱(Immunoaffinity column):採用內含對T-2毒素及HT-2 毒素具專一性單株抗體      
        T-2testTM 管柱,或同級品。
    2.3.8 針筒過濾器(Syringe filter):直徑4 mm,濾膜孔徑0.45 &mum,PTFE 材質。
  2.4 試劑之調製:
    2.4.1 4-二甲基胺基溶液:稱取4-二甲基胺基?啶63 mg 以乙?溶解,再加入乙使成100 mL,冷藏儲    
            ,臨用時
再回溫至室溫。
    2.4.2 2-甲醯基氯溶液:稱取2-?甲醯基氯49 mg 以乙?溶解,再加入乙使成100mL,冷藏儲存,臨用  
           再回溫至室溫。
    2.4.3 90甲醇溶液:取去離子水與甲醇以10:90(v/v)混勻後,供作萃取溶液。  
  2.5 移動相溶液之調製:取去離子水與乙?以25:75(v/v)混勻後,以濾膜過濾後備用。使用前以超音波
           除氣30 分鐘後供作移動相溶液。
  2.6 標準溶液之配製:取T-2 毒素及HT-2 毒素對照用標準品各約10 mg,精確稱定,分別以乙?溶解並定容    
      10 mL,作為標準原液,於-20℃貯存備用。使用時取適量標準原液混合,以移動相溶液稀釋成
       3~200ng/mL,供作標準溶液。標準溶液存放超過一個月時,應重新配製。
  2.7 檢液之調製:
    2.7.1 萃取:固態檢體磨碎混勻後,取檢體約5 g,精確稱定,置於50 mL塑膠離心管中,加入90甲醇
          溶液20mL,旋渦混合1 分鐘,於3000 rpm 離心5 分鐘,收集上層液,以濾紙過濾。取
          濾液10 mL 加水40 mL 混合均勻,再通過玻璃纖維濾紙過濾,取濾液10 mL,供淨化
          用。
    2.7.2 淨化:取2.7.1 節供淨化用濾液10 mL,以每秒1 滴之流速通過免疫親和性管柱,待濾液完全通
          過管柱,以水10 mL 沖洗,流速為每秒1 滴。待管柱內水排淨後,取甲醇1.5 mL,以每
          秒1 滴之流速沖提,收集沖提液,於50℃以氮氣吹乾,殘留物供衍生化用。
    2.7.3 衍生化:於2.7.2 節殘留物中依序加入4-二甲基胺基啶溶液及2-?2甲醯基氯溶液各50 &muL,旋
          渦混合1 分鐘,於50℃水浴中反應10 分鐘,續冰浴10 分鐘,於50℃以氮氣吹乾,殘留
          物以移動相溶液溶解並定容至1 mL,以針筒過濾器過濾,取濾液供作檢液。
  2.8 檢量線之製作:精確量取各標準溶液添加於空白檢體中,依2.7節調製檢液,並參照下列條件進行高效
          液相層析測定,就檢液波峰面積與對應之T-2毒素及HT-2毒素標準品添加濃度,分別製
          作檢量線。高效液相層析測定條件:層析管柱:SunFire C18,3.5 &mum,
          內徑4.6 mm×15 cm。管柱溫度:30℃。螢光檢出器:激發波長237 nm
          發射波長370 nm。移動相溶液:依2 .5節調製之溶液。

本文取自食品藥物檢驗局署授食字第0981800375號公告

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